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      生物技術專業實驗課程教學大綱

      發文時間:2015-05-18 關閉窗口

      一、課程性質及任務
         生物技術專業實驗主要目的是使學生掌握研究與應用生物工程的主要方法與技術,包括經典的、常規的、以及現代的方法與技術,結合生物技術學基礎理論課,認識生物技術的基本特性,比較它們與其它生物的相似和不同之處,將書本知識用于實驗,在實驗中更深地理解基礎理論,使學生在科學實驗方法和實驗技能等方面得到系統的訓練,培養和提高學生在實踐中綜合應用所學的知識去發現問題、分析問題和解決問題的能力,以及創新意識和創新能力。
      二、課程目標
         生物技術專業開設綜合大實驗正是強化學生實踐環節、提高學生動手能力的有效手段之一。通過為期三周的綜合大實驗的訓練,學生可在實驗設計能力、動手能力、創新能力、團隊合作精神等方面有大幅提高,不但為其后續的畢業課題研究打下堅實的基礎,還可增強學生的就業市場競爭力。
      三、課程的教學要求
      (一)淋巴細胞增殖實驗
         本部分要求學生掌握外周血淋巴細胞分離密度梯度離心法分離的原理和方法;掌握外周血淋巴細胞體外培養增殖的方法;掌握計數轉化的淋巴細胞、計算轉化率。
      (二)NK細胞活性測定
         本部分要求學生掌握NK細胞活性檢測的原理,掌握檢測方法;了解NK細胞殺傷百分率。
      (三)Western Blot(免疫印跡實驗)
         使學生掌握聚丙烯酰胺凝膠電泳后,經PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。通過實驗,使學生更加深刻理解所學內容,提高綜合素質。
      (四)葡聚糖凝膠層析
         本部分要求學生掌握凝膠層析的基本原理,以及柱料處理、樣品處理、層析柱灌柱等一系列技術方法。
      (五)大黃中蒽醌類化合物的分離與鑒定
         熟悉液-液萃取分離的原理:向液體混合物中加入某種適當溶劑,利用組分溶解度的差異使溶質A由原溶液轉移到萃取劑的過程。在萃取過程中, 所用的溶劑稱為萃取劑?;旌弦褐杏蛛x的組分稱為溶質?;旌弦褐械娜軇┓Q稀釋劑,萃取劑應對溶質具有較大的溶解能力,與稀釋劑應不互溶或部分互溶。掌握液-液萃取的方法,掌握用液-液萃取法對樣品進行分離方法的設計。
      (六)高效液相色譜儀的使用
         掌握高效液相色譜儀的主要部件的作用,操作使用和原理,熟悉利用高效液相色譜進行生物大分子、有機小分子等的定性和定量分析,了解高效液相色譜軟件的應用。
      (七)毛細管電泳實驗
         掌握毛細管電泳儀的操作,熟悉毛細管電泳的原理,了解各緩沖液的配制和毛細管電泳的使用范圍,重點掌握利用毛細管電泳方法對各種非中性化合物的定性和定量分析。
      (八)黃連中小檗堿的提取與鑒定
         掌握酸提堿沉法對自然界存在的生物堿進行提取,了解離心機、萃取技術的應用,熟悉植物中有效成分的提取方法(超聲提取、浸提、加熱回流)的使用。
      (九)Southern blot原理及實驗方法
         本部分要求學生學習DNA分子雜交技術的原理及實驗操作步驟。掌握將DNA分子從瓊脂糖凝膠轉印到尼龍(或NC)膜上的操作步驟,掌握DNA分子地高辛(DIG)標記及檢測的實驗步驟。
      (十)變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術
         本部分要求學生學習DGGE技術的原理及操作步驟。掌握DGGE對微生態的分析的三個步驟:核酸提取,16S rRNA序列的PCR擴增以及DGGE指紋圖譜分析。
      (十一)畢赤酵母電擊轉化技術
         本部分要求學生學習畢赤酵母等真核細胞電擊轉化外源基因的原理及操作步驟。掌握酵母細胞高效轉化感受態細胞的制備及電擊穿孔轉化方法。
         (十二)發酵罐的使用及注意事項
         學習發酵罐使用的基本原理及操作步驟,在教師的指導下完成發酵罐基本的操作規程,以教師示范為主。
      四、實驗項目與學時分配

       
      注:項目性質:演示、驗證、綜合、設計、創新項目要求:必做、選做


      五、考核及成績評定
      1.考核方式:出勤、操作和實驗報告。
      2.考核標準及比例:要求按時出勤,規范操作,認真撰寫實驗報告??偝煽?00分,出勤和操作占總成績的20%,實驗報告占總成績的80%。

      六、主要參考書
      1、盧圣棟. 現代分子生物學實驗技術. 北京: 中國協和醫科大學出版社. 2004
      2、馬學軍. 精編分子生物學實驗指南. 北京: 科學出版社. 2005
      3、迪芬巴赫, C. M. PCR技術實驗指南. 北京: 科學出版社. 2004
      4、瞿禮嘉. 現代生物技術. 北京: 高等教育出版社. 2004
      5、黃培堂. 細胞實驗指南. 北京: 科學出版社. 2001
      6、張龍翔. 生化實驗方法和技術. 北京: 高等教育出版社. 1997
      7、莽克強. 聚丙烯酰胺凝膠電泳. 北京: 科學出版社. 1975
      8、朱厚礎. 蛋白質純化與鑒定實驗指南. 北京: 科學出版社. 1999

                                                                                          制定人:冀偉、張曉、范麗穎、陳玉娟
                                                                                                               審定人:李景梅

       

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